产品名称:土壤硝酸还原酶(S-NR)试剂盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:LE-1-019,LE-2-019
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
LE-1-019 |
土壤硝酸还原酶(S-NR)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
500 |
LE-2-019 |
土壤硝酸还原酶(S-NR)测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
950 |
土壤亚硝酸还原酶(S-NiR) 试剂盒说明书(可见分光光度法)
产品内容:
试剂一:液体30mL×1 瓶,-20℃保存。
试剂二:粉剂5mL×1 瓶,-20℃保存(临用前加入5ml蒸馏水) 。
试剂三:液体5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:粉剂10mL×1 瓶,-20℃保存(临用前加入10ml蒸馏水)
试剂五:液体25mL×1 瓶,4℃保存(如出现结晶析出,60 度水浴溶解后使用) 。
试剂六:液体25mL×1 瓶,4℃保存。
标准品:液体1mL×1支,10μmol/mL 亚硝酸钠; -20℃保存。
标准液的配制:用时蒸馏水将标准品稀释0.8 、0.6 、0.4 、0.2 、0. 1μmol/mL。
产品说明:
S-NR 催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐,是土壤硝态氮还原的关键酶。研究S-NR 的活性 对合理施肥,降低氮素的损失具有重要意义。S-NR 催化硝酸盐还原为亚硝酸盐,NO3ˉ +NADH+H+→ NO2ˉ +NAD++H2O;产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下,与对–氨基苯磺酸及α-萘胺定量生成红色偶氮化合物;未反应的NADH会抑制后续的显色反应,用PMS将其中和后再进行后续反应;生成的红色偶氮化合物在 520 nm 有最大吸收峰,可用分光光度法测定。
自备实验用品及仪器:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。
操作步骤:
1 、分光光度计预热30min 以上,调节波长至520nm ,蒸馏水调零。
2 、样本测定
试剂名称 |
1mL带盖离心管 |
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测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
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风干土样(g) |
0.1 |
0.1 |
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NaNO2标准液( μL) |
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100 |
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蒸馏水( μL) |
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100 |
试剂一( μL) |
365 |
365 |
365 |
365 |
试剂二( μL) |
35 |
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35 |
35 |
混匀后,于37℃水浴60min。 |
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试剂三( μL) |
50 |
50 |
50 |
50 |
试剂二( μL) |
|
35 |
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立刻混匀, 8000rpm室温离心5min |
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上清液( μL) |
400 |
400 |
400 |
400 |
试剂四( μL) |
100 |
100 |
100 |
100 |
混匀后,于37℃保温20min。 |
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试剂五( μL) |
250 |
250 |
250 |
250 |
试剂六( μL) |
250 |
250 |
250 |
250 |
混匀,显色20min后, 520nm下读取各管吸光值。计算 ΔA测定=A测定- A对照。 ΔA标准=A标准-A空白。
活性计算:
1 、标准曲线绘制:
以 0.8 、0.6 、0.4 、0.2 、0. 1μmol/mL 标准溶液为横坐标, ΔA 标准为纵坐标绘制标准曲线,得到 线性回归方程 y=kx+b ,将 ΔA 测定代入方程得到 x( μmol/mL);
2 、S-NR 活性计算
单位的定义: 24h 每 g 土样中产生 1μmol NO2ˉ的量为一个 S-NR 活力单位。
S-NR(U/g)=x×V 标准÷W÷T=24×x
V 标准: 反应体系中加入的标准液体积,0. 1mL;W:样本鲜重,0. 1g;T:反应时间,1/24h。
注意事项:
1 、试剂一、试剂二和试剂四在冰上放置,用完立即放回-20℃。
2 、每个测定管设一个对照管。
3 、ΔA 测定过小(小于 0.01),可延长反应时间(37℃水浴时间)。
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