产品名称:甘油三酯(TG)测试盒
产品规格:50管/48样,100管/96样
产品货号:YX-C-B408,YX-W-B408
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-B408 |
甘油三酯(TG)测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/48样 |
450 |
YX-W-B408 |
甘油三酯(TG)测试盒 |
微量法 |
100管/96样 |
850 |
甘油三酯( TG) 含量检测试剂盒说明书(可见分光光度法)
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
试剂内容:
试剂一:自备,取100 mL 玻璃空瓶,加入45mL 正庚烷,45mL 异丙醇,盖紧后混匀,4℃保存。
试剂二: 液体 7mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三: 液体 30mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四: 液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂五: 液体 30mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂六: 液体 30mL×1 瓶,4℃避光保存。
标准品: 粉剂×1 瓶,临用前加 5mL 试剂一,即 1mg/mL 甘油三酯标准溶液,4℃保存。
产品说明:
TG 是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,不仅是细胞膜的主要成分,也是重要呼吸底物。
测定原理:
用异丙醇抽提取 TG,KOH皂化 TG 后水解生成甘油及脂肪酸,过碘酸氧化甘油生成甲醛,在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色物质, 在 420 nm 有特征吸收峰,其颜色的深浅与 TG 含 量成正比。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、双蒸水和 100mL 玻璃空瓶。
操作步骤:
一、TG 的提取:
1 、 组织: 按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~ 10的比例(建议称取约0. 1g组织,加入1mL 试剂一) 进行冰浴匀浆,8000g ,4℃离心10min ,取上清待测。
2 、 细胞、细菌: 先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内,弃上清,加 1mL 试剂一,超声波破碎 1min(强度 20%,超声 2s,停 1s),8000g , 4℃离心 10min ,取上清待测。
3 、 血清(浆) 等液体样品: 直接测定。
二、测定操作:
1. 分光光度计预热 30min ,调节波长到 420 nm ,蒸馏水调零。
2. 水浴锅预热到 65℃。
试剂名称(µL) |
空白管 |
标准管 |
测定管 |
双蒸水 |
200 |
|
|
1mg/mL 标准液 |
|
200 |
|
TG 待测液 |
|
|
200 |
试剂一 |
625 |
625 |
625 |
试剂二 |
125 |
125 |
125 |
加试剂一后充分混匀,再加试剂二,剧烈振荡 30s ,静置,待分层后取上层溶液 75µL ,置于新 的 EP 管中。
3. 甘油三酯含量测定:
试剂名称(µL) |
空白管 |
标准管 |
测定管 |
上层溶液 |
75 |
75 |
75 |
试剂三 |
250 |
250 |
250 |
试剂四 |
75 |
75 |
75 |
充分混匀,65℃水浴 3min |
|||
试剂五 |
250 |
250 |
250 |
试剂六 |
250 |
250 |
250 |
充分混匀,65℃水浴 15min |
取出 EP 管,待冷却后,于 420nm 处比色,记为 A 空,A 标和 A 测。
注意: 空白管和标准管只需测定一次。
三、计算公式:
1、(浆) 中甘油三酯含量:
TG 含量(mg/dL)=C 标准品×(A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ×100
=100×(A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空)
C 标准品: 标准品浓度,1mg/mL;100:单位换算系数,1dL=100 mL。
2、组织中甘油三酯含量:
(1)按样本蛋白浓度计算
TG 含量(mg/mg prot)= C标准品×V×(A 测-A 空) ÷(A 标-A 空) ÷(Cpr ×V)
=(A 测-A 空) ÷(A 标-A 空) ÷ Cpr
(2)按样本鲜重计算
TG 含量(mg/g 鲜重) =C 标准品×V× (A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷W
=(A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷ W
C 标准品:1mg/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g ;V:加入试剂一的体积,1mL。
3、细胞、细菌中甘油三酯含量:
TG 含量(mg/104 cell)=C 标准品×(A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷细菌或细胞密度
=(A 测-A 空) ÷ (A 标-A 空) ÷细菌或细胞密度
C 标准品: 标准品浓度,1mg/mL;细菌或细胞密度: 104 cell/mL
注意事项:
1、试剂盒中有易挥发性物质,实验过程中需佩戴手套和口罩,试剂瓶盖打开后应该及时盖紧。
2、加试剂二后需剧烈震荡,使待测液中甘油三酯得到充分提取。
3、最低检出限为 100µ mol/L。
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