产品名称:中性蛋白酶试剂盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:YX-C-B301,YX-W-B301
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-B301 |
中性蛋白酶测试盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
550 |
YX-W-B301 |
中性蛋白酶测试盒 |
微量法 |
100管/48样 |
1000 |
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
规格:100T/48S
产品内容:
提取液:液体 55mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 4mL 蒸馏水溶解。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 4mL 提取液,沸水浴中磁力搅拌溶解。试剂三:液体 20mL×1 瓶, 4℃保存。
试剂四:液体 4mL×1 瓶,4℃保存。
标准品:液体 1mL×1 支,0.25μmol/mL 标准酪氨酸溶液,4℃保存。
产品说明:
NP 在一定的温度和中性 pH 条件下,催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点,中性蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。
中性条件下,NP 催化酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在 680nm 有特征吸收峰。
试验所需自备仪器和用品:
研钵、台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP 管和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
称约 0.1g 组织,加入 1ml 提取液,冰上充分研磨,10000rpm 4℃离心 10min,取上清,即粗酶液,置冰上待测。或直接称取 0.1g 酶制品,加入 1mL 提取液,置冰上待测。
二、测定:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长到 680 nm,蒸馏水调零。
2、试剂一、试剂二和试剂三置于 30℃水浴保温 30min 以上。
3、样本测定(在 1.5mLEP 管中依次加入下列试剂)
试剂名称(µL) |
对照管 |
测定管 |
空白管 |
标准管 |
粗酶液 |
20 |
20 |
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试剂一 |
40 |
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试剂二 |
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40 |
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混匀后 30℃水浴保温 10min |
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试剂一 |
|
40 |
||
试剂二 |
40 |
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|
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混匀后 10000rpm 4℃离心 10min,取上清 |
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上清 |
40 |
40 |
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蒸馏水 |
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40 |
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标准品 |
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40 |
试剂三 |
200 |
200 |
200 |
200 |
试剂四 |
40 |
40 |
40 |
40 |
混匀后 30℃水浴保温 20min |
取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板,于 680nm 测定光吸收,分别记为 A 对照管、A 测定管、A 空白管、A 标准管,并计算△A 测定=A 测定管-A 对照管、△A 标准=A 标准管-A 空白管。
三、NP 酶活性计算:
(1)按蛋白浓度计算
NP 活性单位(U)定义:30℃每毫克蛋白每分钟水解产生 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。
NP 活性(U/mg prot)=C 标准品×△A 测定÷△A 标准×V1÷(Cpr×V2)÷T=0.125×△A 测定÷△A 标准÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
NP 活性单位(U)定义:30℃每克样品每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。
NP 活性(U/g 鲜重)=C 标准品×△A 测定÷△A 标准×V1÷(W×V2÷V3)÷T=0.125×△A 测定÷△A 标准÷W
C 标准品:标准酪氨酸溶液浓度,0.25 μmol/mL;Cpr:粗酶液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品鲜重,g;V1:酶促反应总体积,0.1mL;V2:加入反应体系中粗酶液体积,20µL=2×10-2 mL;V3: 粗酶液总体积,1mL;T:催化反应时间,10min。
注意:
若反应较弱,(A 测定管-A 对照管)差值较小,可适当延长反应时间(20-30min),即第一步水浴时间,最后计算酶活时对公式进行修改。
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