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产品名称:中性蛋白酶试剂盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:YX-C-B301,YX-W-B301

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-B301

中性蛋白酶测试盒

可见分光光度法

50/24

550

YX-W-B301

中性蛋白酶测试盒

微量法

100/48

1000

中性蛋白酶(NP)活性检测试剂盒说明书(微量法

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

规格:100T/48S

产品内容:

提取液:液体 55mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 4mL 蒸馏水溶解。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 4mL 提取液,沸水浴中磁力搅拌溶解。试剂三:液体 20mL×1 瓶, 4℃保存。

试剂四:液体 4mL×1 瓶,4℃保存。

标准品:液体 1mL×1 支,0.25μmol/mL 标准酪氨酸溶液,4℃保存。

产品说明:

NP 在一定的温度和中性 pH 条件下,催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点,中性蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。

中性条件下,NP 催化酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在 680nm 有特征吸收峰。

试验所需自备仪器和用品:

研钵、台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP 管和蒸馏水。

操作步骤:

一、粗酶液提取:

称约 0.1g 组织,加入 1ml 提取液,冰上充分研磨,10000rpm 4℃离心 10min,取上清,即粗酶液,置冰上待测。或直接称取 0.1g 酶制品,加入 1mL 提取液,置冰上待测。

二、测定:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长到 680 nm,蒸馏水调零。

2、试剂一、试剂二和试剂三置于 30℃水浴保温 30min 以上。

3、样本测定( 1.5mLEP 管中依次加入下列试剂)

试剂名称µL)

对照管

测定管

空白管

标准管

粗酶液

20

20

 

 

试剂一

40

 

试剂二

 

40

混匀后 30℃水浴保温 10min

试剂一

 

40

试剂二

40

 

 

 

混匀后 10000rpm 4℃离心 10min,取上清

上清

40

40

 

 

蒸馏水

 

 

40

 

标准品

 

 

 

40

试剂三

200

200

200

200

试剂四

40

40

40

40

混匀后 30℃水浴保温 20min

200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板,于 680nm 测定光吸收,分别记为 A 对照管、A 测定管、A 空白管、A 标准管,并计算△A 测定=A 测定管-A 对照管、△A 标准=A 标准管-A 空白管。

三、NP 酶活性计算:

(1)按蛋白浓度计算

NP 活性单位(U)定义:30℃每毫克蛋白每分钟水解产生 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

NP 活性(U/mg prot)=C 标准品×△A 测定÷△A 标准×V1÷(Cpr×V2)÷T=0.125×△A 测定÷△A 标准÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

NP 活性单位(U)定义:30℃每克样品每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

NP 活性(U/g  鲜重)=C 标准品×△A 测定÷△A 标准×V1÷(W×V2÷V3)÷T=0.125×△A 测定÷△A 标准÷W

C 标准品:标准酪氨酸溶液浓度,0.25 μmol/mL;Cpr:粗酶液蛋白质浓度,mg/mL;W:样品鲜重,g;V1:酶促反应总体积,0.1mL;V2:加入反应体系中粗酶液体积,20µL=2×10-2 mL;V3: 粗酶液总体积,1mL;T:催化反应时间,10min。

注意:

若反应较弱,(A 测定管-A 对照管)差值较小,可适当延长反应时间(20-30min),即第一步水浴时间,最后计算酶活时对公式进行修改。



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