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产品名称:碱性蛋白酶检测试剂盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:LE-1-361,LE-2-361

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-361

碱性蛋白酶测试盒

可见分光光度法

50/24

550

LE-2-361

碱性蛋白酶测试盒

微量法

100/48

1000

碱性蛋白酶(AKP)活性检测试剂盒说明书(可见分光光度法

产品内容:

提取液:液体 35mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 10 mL 蒸馏水溶解。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 10 mL 提取液,沸水浴中磁力搅拌溶解。试剂三:液体 50ml×1 瓶, 4℃保存。

试剂四:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。

标准品:液体 1mL×1 支,0.25 μ mol/mL 标准酪氨酸溶液,4℃保存。

产品说明:

AKP 是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类,属于丝氨酸蛋白酶。此外,该酶还能够水解酯键、酰胺键,具有转酯及转肽的功能。该酶是主要工业用酶之一,广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。

在碱性条件下,AKP 水解酪蛋白生成酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝;钨蓝在 680nm 有特征吸收峰,测定 680nm 吸光度增加速率,来计算 AKP 活性。

试验所需自备的仪器和用品:

研钵、台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP 管、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

操作步骤:

一、粗酶液提取:

称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,冰上充分研磨,10000rpm 4℃离心 10min,取上清液,即粗酶液,置冰上待测。或直接称取 0.1g 酶制品,加入 1mL 提取液,置冰上待测。

二、测定:

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长到 680 nm,蒸馏水调零。

2、试剂一、试剂二和试剂三置于 40℃水浴保温 30min 以上。

3、样本测定( 1.5mLEP 管中依次加入下列试剂)

试剂名称µL)

对照管

测定管

空白管

标准管

粗酶液

100

100

 

 

试剂一

200

 

 

 

试剂二

 

200

 

 

混匀后 40℃水浴保温 10min

 

 

试剂一

 

200

 

 

试剂二

200

 

 

 

混匀后 10000rpm 4℃离心 10min,取上清

 

 

上清

200

200

 

 

蒸馏水

 

 

200

 

标准品

 

 

 

200

试剂三

1000

1000

1000

1000

试剂四

200

200

200

200

混匀后 40℃水浴保温 20min

1mL 1mL 玻璃比色皿中,在 680nm 测定光吸收,分别记为 A 对照管、A 测定管、A 空白管、A 标准管。

三、碱性蛋白酶活性计算:

(1)按蛋白浓度计算

AKP 活性单位(U)定义:40℃每毫克蛋白每分钟催化水解产生 1 μ mol 酪氨酸为一个酶活单位。

AKP 活性U/mg prot)=C 标准品×(A测定管-A 对照管÷(A标准管-A 空白管)×V1÷(Cpr×V2)÷T=0.125×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

AKP 活性单位(U)定义:40℃每克样品每分钟催化水解产生 1 μ mol 酪氨酸为一个酶活单位。

AKP 活性(U/g 鲜重)=C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V1÷(W×V2÷V3)÷T=0.125×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

标准品:0.25 μmol/mL 标准酪氨酸溶液; Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL);W:样品质量g V1:酶促反应总体积(mL),0.5mL;V2:加入反应体系中粗酶液体积mL),0.1 mL;V3:粗酶液总体积(mL)1mL;T:催化反应时间(min)10min。

注意:

若反应较弱,(A 测定管-A 对照管)差值较小,可适当延长反应时间(20-30min),即第一步水浴时间,最后计算酶活时对公式进行修改。


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