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产品名称:糜蛋白酶检测试剂盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-358,LE-2-358

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-358

糜蛋白酶测试盒

紫外分光光度法

50/48

600

LE-2-358

糜蛋白酶测试盒

微量法

100/96

1100

糜蛋白酶(Chymotrypsin)试剂盒说明书(微量法

测定意义:

糜蛋白酶,又称胰凝乳蛋白酶,是胰腺分泌的一种蛋白水解酶,能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与胰蛋白酶相似,但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化,对脓性和非脓性痰液均有效;也用于创伤或手术后伤口愈合,如白内障摘除。

测定原理:

糜蛋白酶催化ATEE水解,产物在237nm有特征光吸收;通过测定237nm光吸收增加速率,来计算糜蛋白酶活性。

自备仪器和用品:

台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV )、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入20mL蒸馏水充分溶解。

粗酶液提取:

组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)冰浴匀浆,8000g4℃离心10min,取上清,即粗酶液。

测定步骤:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到237nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二置于37℃水浴中保温30min

3. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μL试剂一,200μL试剂二,混匀于237nm测定4min内吸光值变化,记为△A 空白管。(从吸光值稳定增加开始计时)

4. 测定管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μL 粗酶液,200μL试剂二,混匀于237nm测定4min内吸光值变化,记为△A测定管。(从吸光值稳定增加开始计时)

注意:空白管只需要测定一次。

糜蛋白酶活性计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1)按蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。

糜蛋白酶(U/mg prot= (A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V1)÷T

=2.75×(A 测定管-△A 空白管)÷Cpr

2)按样本质量计算

活性单位定义:25℃每克样品每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。

糜蛋白酶(U/g=(A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(W×V1÷V2)÷T

=2.75×(A 测定管-△A 空白管)÷W

W:样品质量(g);Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),20μL=2×10-2 mLV2:粗酶液总体积(mL),1 mLV 反总:反应总体积,220μL=0.22mLT:反应时间(min),4min

b.使用 96 孔板测定的计算公式如下

1)按蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。

糜蛋白酶(U/mg prot= (A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V1)÷T

=2.75×(A 测定管-△A 空白管)÷Cpr

2)按样本质量计算

活性单位定义:25℃每克样品每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。

糜蛋白酶(U/g=(A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(W×V1÷V2)÷T

=2.75×(A 测定管-△A 空白管)÷W

W:样品质量(g);Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),20μL=2×10-2 mLV2:粗酶液总体积(mL),1 mLV 反总:反应总体积,220μL=0.22mLT:反应时间(min),4min

注意事项:

临用前配制的试剂配置好后3天内使用完毕。


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