果糖-1,6-二磷酸（ Fructose-1,6 Diphosphate ，FDP）试剂盒说明书（微量法）

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

果糖 1,6-二磷酸是机体内的高能代谢物和代谢调控剂，是糖酵解途径的重要中间体，广泛存在于动植物和微生物体内，能影响细胞内钾离子的浓度，改善葡萄糖和其他能量底物的代谢，促进组织氧的释放，广泛应用于临床医药制剂。

测定原理

醛缩酶催化果糖 1,6-二磷酸降解，产物与 DNPH 缩合成紫红色物质，在 540nm 有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

试剂组成和配制

试剂一：液体 105mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 0.4mL×1 支，4℃避光保存。

试剂三：液体 4mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体 16mL×1 瓶，4℃保存。

样品处理

1. 组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g 离心10min，取上清待测。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后 4℃，10000g 离心 10min，取上清待测。

3. 液体：直接检测。

测定操作

计算公式

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y= 0.6971x+0.0012，R²=0.9983

1．按照质量计算

FDP（mg/g）= (△A-0.0012) ÷0.6971×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）

= 18.94×(△A-0.0012)÷W

2．按照细胞数量计算

FDP（mg/10⁴cell）= (△A-0.0012) ÷0.6971×V 反总÷（W×细胞数量÷V 样总）

= 18.94×(△A-0.0012)÷细胞数量

3．按照液体体积计算

FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.6971×V 反总÷V 样

= 18.94×(△A-0.0012)

V 反总：反应总体积，0.264mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，

g；V 样总：加入提取液体积，1mL

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.3486x+0.0012，R²=0.9983

1．按照质量计算

FDP（mg/g）= (△A-0.0012) ÷0.3486×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）

= 37.88×(△A-0.0012)÷W

2．按照细胞数量计算

FDP（mg/10⁴cell）= (△A-0.0012) ÷0.3486×V 反总÷（W×细胞数量÷V 样总）

= 37.88×(△A-0.0012)÷细胞数量

3．按照液体体积计算

FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.3486×V 反总÷V 样

= 37.88×(△A-0.0012)

V 反总：反应总体积，0.264mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，

g；V 样总：加入提取液体积，1mL

注意事项：最低检出限为 1.72 mg/L。