植物氨态氮含量检测试剂盒说明书（可见分光光度法）

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

规格：50T/48S

产品内容：

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存，临用前将试剂三倒入使其充分溶解备用。该试剂溶解后10 天内有效。

试剂二：粉剂×2 瓶，4℃避光保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解。

试剂三：液体 45mL×1 瓶，4℃保存。

标准品：粉剂×1 支， 10mg 半胱氨酸， 4℃避光保存。临用前加入 1.157mL 提取液， 得到 1000μg/mL 氮标准液。

产品说明：

氮素是构成生物体的一种必需元素。铵态氮进入植物细胞后形成氨基酸或酰胺，植物组织氨氮 含量可反映植物受胁迫的程度。

氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在 570 nm 有特征吸收峰； 通过测定 570 nm 吸光度，来计算氨基酸含量。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水 乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

按照质量（g）： 提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g ，加入 1mL 提取液） 加入 提取液，室温匀浆后于 25℃ ，12000g 离心 10min ，取上清待测。

二、测定步骤：

1 、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 570nm ，蒸馏水调零。

2 、 将 1000μg/mL 氮标准液用提取液分别稀释为 200 、100 、50 、25 、12.5μg/mL。

3 、 操作表：

混匀后盖紧瓶盖封口膜封口（防止水分散失），置于沸水浴中保温 10 min ，冷却后反复颠倒 EP管数次，将测定管 8000rpm 离心 5min 后取上清， 于 570nm 测定吸光值。显色后务必在 30min 内测 完。计算△A=A 测定管-A 空白管，△A 标准=A 标准管-A 空白管。

三、植物氨态氮含量计算：

1 、标准曲线的绘制

以各个氮标准液为横坐标，其对应的△A 标准为纵坐标， 建立标准曲线， 得到标准方程 y=kx+b， 将△A 带入方程中，得到 x (µg/mL)

2 、NH3-N 含量的计算

（1）按样本鲜重计算

NH3-N 含量（ µg /g FW）=x×V 提取÷W= x÷W。

（2）按蛋白浓度计算

NH3-N  含量（ µg/mg  prot）=x×V  提取÷ （Cpr×V提取）= x÷Cpr 。W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；V 提取：样品提取液总体积，1mL。

注意事项：

为保证实验结果的准确性，需先取 1-2 个样做预实验，如果测定的吸光值过高（高于 1），用提取液 稀释后再测定。