脲酶 测定试剂盒说明书（分光光度法）

货号：LE-1-310

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

UE 能够水解尿素，产生氨和碳酸。UE 活性与有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关， 反应了氮素状况。

测定原理：

利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的 NH3-N。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml 比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：粉剂×1瓶， 临用前加入 5mL 蒸馏水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的试剂 4℃保存；

试剂二：液体 12mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三 A 液：液体×1 支，4℃保存；

试剂三 B 液：液体×1 瓶，4℃保存；临用前将 A 液倒 入 B 液中混合，待用；用不完的试剂 4℃保存一周；

试剂四：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；

样本的前处理：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量 （104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提 取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min ，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 578nm ，蒸馏水调零。

2、酶促反应

混匀，放入 37℃水浴 1h 后，10000g 25℃离心 10min，取上清液。

2、将上清液稀释 10 倍（取 0.1mL 上清液，加入 0.9mL 蒸馏水）。

3、测氨量（在 1ml 比色皿中加入下列试剂）

充分混匀，室温放置 20min

混匀，于 578nm 处，蒸馏水调零，读吸光值 A ，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。

UE 活力计算

标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0915x +0.0373 ；x 为标准品浓度(μg/mL），y为吸光值A。

1、血清（浆） UE 活力的计算:

单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。

UE 活力(μg/min/mL）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷V 样÷T

=27.32×(ΔA -0.0373)

2、组织、细菌或细胞中 1μg NH3-N 活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。

UE  活力(μg/min/mg  prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V  反总÷(V 样×Cpr)÷T  

=27.32×(ΔA -0.0373) ÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。

UE 活力(μg/min/ g  鲜重）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=27.32×(ΔA -0.0373) ÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1μg NH3-N 定义为一个酶活力单位。

UE 活力(μg/min/10⁴ cell）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷

T=0.0546×ΔA  10：稀释倍数；T：反应时间，60min；

V 反总：反应体系总体积：0.3mL；V 样：加入反 应体系中样本体积，0.02mL；V 样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500 万。