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产品名称:总多糖含量检测试剂盒(苯酚-硫酸法)

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-W-ZDT,YX-C-ZDT

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-W-ZDT

总多糖测试盒

可见分光光度法

50管/48样

400

YX-W-ZDT

总多糖测试盒

微量法

100管/96样

750

总多糖含量测定试剂盒说明书(微量法

产品内容:

试剂一:12mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:无水乙醇,自备。

试剂三:浓硫酸,自备。

标准品:粉剂 10mg×1 支,4℃避光保存。

产品说明:

多糖是生物体中广泛存在的物质,是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物,它是生物体内重要的生物大分子,是维持生命活动正常运转的基本物质之一。

利用水提醇沉法提取总多糖,苯酚-硫酸法测定总多糖含量。

自备仪器和用品:

分析天平、酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、无水乙醇、浓硫酸、蒸馏水、水浴锅。

操作步骤:

一、总多糖提取

样本烘干粉碎,称取约 0.05g 样本,加入 1mL 水,充分匀浆。100℃水浴提取 2h(必须盖紧盖子防止水分流失),冷却后 10000g 离心 10min,取上清。吸取 0.2mL 上清,慢慢加入 0.8mL 无水乙醇,混匀后 4℃静置过夜,10000g 离心 10min,弃上清,沉淀中加入 1mL 水,充分混匀溶解沉淀。

二、测定步骤

1、酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 490nm。

2 、称 1mg 标准品用 1mL 蒸馏水溶解, 浓度为 1mg/mL 。取适当溶液配制浓度为1mg/mL 、0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg/mL、0.0625mg/mL 的标准品(蒸馏水进行稀释)。取 1.5mL EP 管吸取 200µL 标准品,加入 100µL 试剂一和 0.5mL 浓硫酸,混匀后 90℃水浴 20min,流水冷却。取200µL 加入酶标板,于 490nm 下测定吸光值A。根据吸光度(x)和浓度(y,mg/mL 做出标准曲线。

3、吸取 200µL 上清,加入 100µL 试剂一和 0.5mL 浓硫酸,混匀后 90℃水浴 20min,流水冷却。取 200µL 加入酶标板,于 490nm 下测定吸光值 A。

三、总多糖含量计算

根据标准曲线,将样品△A 带入公式中(x),计算出样品浓度 y(mg/mL)。

1) 按样本鲜重计算

总多糖(mg /g 干重)=5y÷W

V 样总:上清液总体积,mL;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;W:样品质量,g ;样本体积已被稀释五倍,T。

注意事项:
1.如果样品吸光值A 大于 最大浓度标准品吸光值,需要将样本用蒸馏水稀释,计算公式中再乘以相应稀释倍数。
2.由于浓硫酸具有强腐蚀性,请谨慎操作



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