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产品名称:鸟氨酸转氨酶(OAT)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:OAT-1-Y,OAT-2-Y

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

OAT-2-Y

鸟氨酸转氨酶(OAT)测试盒

可见分光光度法

50/48

550

OAT-1-Y

鸟氨酸转氨酶(OAT)测试盒

微量法

100管/96

1000

鸟氨酸转氨酶(nithine-δ-aminotransferase ,δ-OAT)试剂盒说明书可见分光光度法

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

脯氨酸是植物体内适应逆境胁迫的一种重要的渗透调节物质。高等植物中脯氨酸代谢因其初始底物不同,分为谷氨酸( Glu) 和鸟氨酸( Orn) 两条合成途径。鸟氨酸转氨酶( δ-OAT)  是是以鸟氨酸为前体合成脯氨酸途径的关键酶,对植物适应逆境胁迫起关键作用。

测定原理

鸟氨酸和α-酮戊二酸在鸟氨酸转氨酶和 NADH 作用下发生氨基转移反应生成吡咯啉-5-羧酸(P5C),同时产生 NAD,通过检测 340nm 处的吸光度的变化可反映出鸟氨酸转氨酶活性的高低。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、研钵、紫外可见分光光度计、1mL 石英比色皿。

试剂组成和配制

提取液:液体 55mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 70 mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加 20mL 试剂一充分溶解;用不完的试剂 4℃保存。

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加 20mL 试剂一充分溶解;用不完的试剂 4℃保存。

试剂四:粉剂×2 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加 10mL 试剂一充分溶解;现配现用。

酶液提取

1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于 4℃,10000g 离心 10min,取上清置冰上待测。

2. 细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒, 总时间 3min);然后 4℃,10000g 离心 10min,取上清置冰上待测。

3. 液体:直接检测。

测定操作

1. 分光光度计预热 30min,调节波长至 340nm。

2. 将配好的试剂二、三、四 37℃预热 5min。(注意:粉剂试剂需要自行配制

3.  1mL 石英比色皿,依次加入 300μL 试剂二,300μL 试剂三,300μL 试剂四,100μL 粗酶液,充分混匀,记录 340nm 处初始吸光值和 37℃反应 10min 的吸光值 A2A=A1-A2。

计算公式

按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

δ-OAT(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=160.77×ΔA÷Cpr

按照样本质量计算

酶活单位定义:每克组织每分钟消耗 1 nmol 的NADH 定义为一个酶活力单位。

δ-OAT(nmol/min /g 鲜重)=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=160.77×ΔA÷W

按照细胞数量计算

酶活单位定义:每 104 个细胞每分钟消耗 1 nmol 的NADH 定义为一个酶活力单位。


δ-OAT(nmol/min /104 cell)= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) ÷T=160.77×ΔA÷细胞数量

按照液体体积计算

酶活单位定义:每毫升液体每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。δ-OAT(nmol/min /mL)=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷V 样÷T=160.77×ΔA

V 反总:反应体系总体积,1mL;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×10 3 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,10 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g



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