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产品名称:半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:LE-1-202,LE-2-202

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-202

半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)测试盒

可见分光光度法

50/24

650

LE-2-202

半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)测试盒

微量法

100管/48

1200

半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL试剂盒说明书(可见分光光度法

测定意义

半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)广泛存在于百合科葱属(如大蒜和洋葱),十字花科芸薹属(如卷心菜,菜花,西兰花),以及豆科中的合金欢属中,并通常被称为蒜氨酸酶(Alliinase)。香菇酸在γ-谷氨酰转肽酶和半胱氨酸亚砜裂解酶的作用下转化成香菇精,以及产生丙酮酸、乙醛、甲醛和NH3。CSL 是内源性甲醛生成的关键酶之一,测定 CSL 活性对于研究食品安全具有重要意义。

测定原理

CSL 催化 S-甲基-L-半胱氨酸亚砜反应产生丙酮酸,与 2,4-二硝基苯肼反应,在碱性条件下显棕红色,在 510nm 下有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、离心机、分光光度计、1mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1 瓶,4℃避光保存,临用前加入 2mL 水溶解,用不完的试剂分装后-20℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存,临用前加入 10mL 水溶解,用不完的试剂分装后-20℃ 保存;

试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。

试剂四:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂五:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。 

样本处理

按照组织质量(g):提取液体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液),进行冰浴匀浆,4℃浸提 40min。12000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定操作

 

对照管

测定管

样品(μL

100

100

试剂一(μL

 

50

蒸馏水(μL

50

 

试剂二(μL

50

50

充分混匀,37℃反应 20min

试剂三(μL

200

200

试剂四(μL

100

100

充分混匀,室温反应 5min

试剂五(μL

500

500

充分混匀,静置 5min,于 1mL 玻璃比色皿测定 510nm 处吸光值,记为A 对照和A 测定,A=A 测定-A 对照。

每个测定管设一个对照管。

计算公式

标准曲线:y = 1.4626x + 0.0027,R2 = 0.9993;x 为标准品浓度:μmol/mL;y 为吸光度△A

1、按蛋白含量计算

C-S lyase 活性(μmol/min/mg prot)=(△A -0.0027)÷ 1.4626×V 样÷(V 样×Cpr )÷T=0.034×(△A-0.0027)÷ Cpr

2、按照样本质量计算

C-S lyase 活性(μmol/min/g 鲜重)=(△A -0.0027)÷ 1.4626×V 样÷(V 样÷V 样总×W )÷T=0.034×(△A-0.0027)÷ W

V 样,加入样本上清体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T,反应时间,0min。

注意事项

1、若测定结果中吸光值超过 2,请将样本稀释后进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。香菇类样本活性较大,可能需要稀释 80-100 倍。


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