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产品名称:硝酸还原酶(NR)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-311,LE-2-311

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-311

硝酸还原酶(NR)测试盒

分光光度法

50/48

240

LE-2-311

硝酸还原酶(NR)测试盒

微量法

100管/96样

450

硝酸还原酶(NR)活性检测试剂盒说明书(分光光度法

货号:LE-1-311

正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

产品内容:

诱导剂储备液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。10 倍稀释后使用,现配现用。

提取液:液体 80mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 30mL×1 瓶,-20℃保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存。临用前加入5mL提取液溶解,可分装后-20℃保存,避免反复冻融。-20℃可保存 2 周。

诱导剂应用液的配制:

用时将诱导剂储备液用水稀释10倍,即取10mL诱导剂储备液加90mL蒸馏水,充分混匀。

产品说明:

NR( EC 1.7. 1.3)广泛存在于植物中,是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶,也是诱导酶,对 作物的产量和品质有影响。

NR 催化硝酸盐还原为亚硝酸盐,NO3¯+NADH+H→ NO2¯ +NAD +H2O,NADH 在 340nm 下 有特征吸收峰,340nm 下吸光值的变化即可表示酶活。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样品测定的前处理

1 、取适量诱导剂于烧杯中,将新鲜标本洗净,滤纸吸干,放入诱导剂应用液中(淹没即可) 避光, 浸泡2h ,取出样本,滤纸吸干后,-20℃冷冻 30min ,取出样本,滤纸吸干。 (根据需要进行诱导处理)

2 、称取约 0. 1g 样本,加入 1mL 提取液,冰浴研磨,4000g 4℃离心 10min ,取上清置冰上待测

二、测定步骤

1 、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm ,蒸馏水调零。

2 、样本测定(在 EP 管中加入下列试剂)

试剂名称(µL)

测定管

空白管

样本

60

-

提取液

340

400

试剂一

540

540

试剂二

60

60

充分混匀后测定 340nm 下的初始值 A1 25℃(其他物种) 或 37℃(哺乳动物) 反应 30min 后 再次测定吸光值 A2 ,计算△A 测定管=A1 测定管-A2 测定管,△A 空白管= A1 空白管-A2 空白管,△A=△A 测定管-△A 空白管。

注意:白管只需测 1-2 次。

三、NR 活性计算:

1)按样本鲜重计算:

酶活单位定义:每小时每 g 鲜重样品中消耗 1µmol NADH 的量为一个 NR 活力单位。 

NR(U/g 鲜重) =[∆A×V 反总÷ ( ε×d)×106]÷(W÷V 提取×V ) ÷T=5.359×∆A÷W。

2)按样本蛋白浓度计算:

酶活单位定义:每小时每 mg 组织蛋白消耗 1µmol NADH 的量为一个 NR 活力单位。 

NR(U/mg prot)=[∆A×V 反总÷ ( ε×d)×106]÷(V ×Cpr)÷T=5.359×∆A÷Cpr。

反总:反应体系体积,0.001L;V 样: 吸取样本体积,0.06mL;V 提取: 加入提取液体积, 1mL;T:反应时间,0.5h;ε:NADH 的摩尔消光系数: 6220 L/mol/cm;d:比色皿光径: 1cm;Cpr: 样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;106:单位换算系数,1mol=106µmol。

注意事项

1、 当测定的吸光值大于 1.5 或者∆A 大于 0.6 时,建议将上清液稀释后测定。

2、 ∆A 测定过小(小于 0.01),可延长酶促反应时间。

3、 建议一次测定不要测定过多样品以免耽误过多的酶促反应时间。

4、 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔,正常情况下,空白管的初始测定值(A1 空白管)在 0.9 左右,变化不超过0.05。



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