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产品名称:单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-278,LE-2-278

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-278

单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒

紫外分光光度法

50管/48样

800

LE-2-278

单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒

微量法

100管/96样

1500

单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR试剂盒说明紫外分光光度法

测定意义:

MDHAR 催化 MDHA 还原生成 AsA ,在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。

测定原理:

MDHAR  催化 NADH  还原 MDHA  生成 AsA 和 NAD+ ,NADH 在 340 nm 有特征吸收峰, 但是 NAD+没有。通过测定 340 nm 光吸收下降速率,来计算出MDHAR 活性。

实验中所需仪器及设备:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和双蒸水 

剂组成和配置:

试剂一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 50mL×1 瓶,室温保存。

试剂三:粉剂×1瓶(棕色),4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。

试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。

试剂五:液体 25 μL×1 瓶,4℃保存。临用前加 5mL 试剂二充分溶解。

粗酶液提取:

1、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1 :5~ 10 的比例(建议称取约 0. 1g 组织, 加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g ,4℃离心 10min ,取上清置冰上待测。

2、 细菌、真菌:按照细胞数量(10个):试剂一体积(mL)为 500~ 1000:1 的比例(建 议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w ,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);8000g  ,4℃离心 20min ,取上清液置冰上混匀待测。

3、血清等液体:直接测定。

MDHAR 测定操作:

1.  分光光度计预热 30 min ,调节波长到 340 nm ,蒸馏水调零。

2.  试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min

3.  依次在比色皿中加入 100μL 试剂三、100μL 试剂四、100μL 试剂五和 600μL 试剂二, 后加入 100μL 上清液,迅速混匀后于 340nm 比色,记录 30s 和 150s 的吸光值 A1 和 A2 , △A=A1-A2。

MDHAR 活性计算公式:

( 1).  按蛋白浓度计算

MDHAR 活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADH  为 1 个酶活单位。 

MDHAR (nmol/min /mg prot) = △A÷ε÷d×V 反总×109]÷(Cpr×V 样)÷T= 804×△A ÷Cpr

(2).  按样本质量计算

MDHAR 活性单位定义:25℃中每克样本每分钟氧化 1nmol NADH  为 1U 。 

MDHAR (nmol/min /g 鲜重) = △A÷ε÷d×V 反总×109]÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 804×△A ÷W

(3)按细胞数量计算

MDHAR 活性单位定义:25℃中每 10个细胞每分钟氧化 1nmol NADH   1 个酶活单位。

MDHAR (nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T = 804×△A ÷  细胞数量

(4)按液体体积计算

MDHAR 活性单位定义:25℃中每毫升液体每分钟氧化 1nmol NADH  为 1 个酶活单位。 

MDHAR (nmol/min /mL) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷V 样)÷T= 804×A

ε:NADH 摩尔消光系数,6220 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应体系总体积, 1mL=0.001 L ,V 样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0. 1mL;Cpr:上清液蛋白浓度, mg/mL ,蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公司蛋白质含量 BCA 试剂盒;V 样总:加 入提取液体积,1mL;W ,样本质量,g;T:反应时间,2min。

注意事项:

临用前配制的试剂未使用完的 4℃保存,3 天内使用完。


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