产品名称:抗坏血酸氧化酶(AAO)测试盒
产品规格:50管/48样,100管/96样
产品货号:YX-C-A303,YX-C-A303
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-A303 |
抗坏血酸氧化酶(AAO)活性测试盒 |
紫外分光光度法 |
50管/48样 |
520 |
YX-C-A303 |
抗坏血酸氧化酶(AAO)活性测试盒 |
微量法 |
100管/96样 |
1000 |
注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白,属“蓝铜氧化酶”家族。细胞壁内的抗坏血酸和AAO与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。AAO 氧化AsA所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素 b还原,该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。
测定原理:
AAO可直接氧化 AsA,通过测定AsA的氧化量,可计算得AAO活力。
实验中所需仪器及设备:
低温离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。
粗酶液提取:
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
AAO 测定操作:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到265nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。
3. 依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、850μL预热的试剂二和50μL试剂三,迅速混匀后在265nm 测定10s和130s光吸收A1和A2,△A =A1-A2。
AAO 活性计算公式:
(1). 按蛋白浓度计算
AAO 活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA为1个酶活单位。
AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d)×V 反总×109 ÷(Cpr×V 样)÷T
= 92.4×△A÷Cpr
(2). 按样本质量计算
AAO 活性单位定义:25℃中每克样本每分钟氧化 1nmol AsA 为1个酶活单位。
AAO(nmol/min/g) = △A÷(ε×d)×V 反总×109 ÷(W×V 样÷V 样总)÷T
= 92.4×△A÷W
ε:AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol/cm;d:比色皿光径(cm),1 cm;V 反总:反应体系总体积(L),1000μL=1×10-3 L;106 :1mol=1×109 nmol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒;V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),100μL=0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W,样本质量,g;T:催化反应时间(min),2min。
注意事项:配制好的试剂放在 4℃保存,三天内使用完。
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