欢迎来合肥莱尔生物科技有限公司!我们将为您提供周到的服务!销售热线:0551-66107970 15375214453
为更好查询产品,请搜索中英文简称,如丙二醛(MDA)试剂盒,搜索”丙二醛”或”MDA”
联系我们Contact us
公司名称:合肥莱尔生物科技有限公司
联系人:陈经理
固话:0551-66107970
手机:15375214453
地址:合肥市包河经济开发区花园大道17号

产品名称:抗坏血酸氧化酶(AAO)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:YX-C-A303,YX-C-A303

产品报价:

免费咨询:0551-66107970

发邮件给我们:737388448@qq.com

分享到:

 

货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-A303

抗坏血酸氧化酶(AAO)活性测试盒

紫外分光光度法

50/48

520

YX-C-A303

抗坏血酸氧化酶(AAO)活性测试盒

微量法

100管/96

1000

抗坏血酸氧化酶(ascorbate oxidase,AAO)活性测定试剂盒说明书微量法

注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。


测定意义:

AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白,属“蓝铜氧化酶”家族。细胞壁内的抗坏血酸和AAO 与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。AAO氧化AsA所形成的MDHA可通过质膜上的细胞色素b 还原,该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。

测定原理:

AAO可直接氧化AsA,通过测定AsA的氧化量,可计算得AAO活力。

自备实验用品及仪器:

低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV 板)、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。 临用前加入2mL蒸馏水充分溶解。

粗酶液提取:

按照组织质量g):试剂一体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。

AAO 测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到265 nm。
2. 试剂二在 25℃水浴锅中预热30 min。
3. 依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μ L上清液、170μ L预热的试剂二和10μ L试剂三, 迅速混匀后在265nm测定10s和130s光吸收A1和A2,△A =A1-A2。
AAO 活性计算公式:
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1). 按蛋白浓度计算
AAO 活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA为1个酶活单位。AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε ×d)×V 反总×109 ÷(Cpr×V 样)÷T
= 92.4×△A÷Cpr
(2). 按样本质量计算
AAO 活性单位定义:25℃中每克样本每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。AAO(nmol/min/g) = △A÷(ε ×d)×V反总×109 ÷(W×V样÷V样总)÷T
= 92.4×△A÷W
ε :AsA 在265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol/cm;d:比色皿光径(cm),1 cm; V 反总:反应体系总体积(L),200μ L=2×10-4 L;106 :1mol=1×106 μ mol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒;W :样品
质量;V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μ L=0.02 mL;V 样总:提取液体积,1 mL; T:催化反应时间(min),2min。
b. 使用96孔板测定的计算公式如下(1). 按蛋白浓度计算
AAO 活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。AAO(nmol/min/mg prot) = △A÷(ε ×d)×V反总×109 ÷(Cpr×V样)÷T
=184.8×△A÷Cpr
(2). 按样本质量计算
AAO 活性单位定义:25℃中每克样本每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。AAO(nmol/min/g) = △A÷(ε ×d)×V反总×109 ÷(W×V样÷V样总)÷T
= 184.8×△A÷W
ε :AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol/cm;d:96孔板光径(cm),0.5 cm; V反总:反应体系总体积(L),200μ L=2×10-4 L;106:1mol=1×106μ mol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒;W :样品质量;V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μ L=0.02 mL;V 样总:提取液体积,1 mL; T:催化反应时间(min),2min。
注意事项:
配制好的试剂放在 4℃保存,三天内使用完。



 相关新闻:
全国统一客服电话:

0551-66107970

地址:合肥市包河经济开发区花园大道17号
合肥市双凤经济开发区金珠路合肥莱尔生物科技有限公司2楼1515室
联系人:陈经理
手机号码:15375214453
固定电话:0551-66107970
公司网址:www.laier-bio.com

版权所有 © 合肥莱尔生物科技有限公司  皖ICP备17006278号-2

在线客服
在线客服
用心服务 成就你我