葡萄糖含量检测试剂盒说明书(分光光度法)

货号：LE-1-095

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定

产品简介：

葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物，而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言，葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯一能源，而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。

产品内容：

试剂一：葡萄糖 9mg×1支，4℃保存；临用前加入1ml蒸馏水充分溶解为50μmol/mL 葡萄糖溶液，用蒸馏水稀释为 0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 -20℃ 保存；

试剂二：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；

混合试剂的配制：使用前将试剂二和试剂三 1:1 等体积混合，用多少配多少。

操作步骤：

一、葡萄糖提取：

1、组织的处理：称取约 0.1g 样本，加入 1mL 蒸馏水研磨成匀浆，置沸水浴中煮沸 10 分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，常温离心 10min，取上清液备用。

2、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：蒸馏水体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 蒸馏水）， 超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3S，间隔 10S，重复 30 次），置沸水浴中煮沸 10  分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心 10min，取上清液备用。

二、测定操作表：

1、分光光度计预热 30min。波长调至 505nm，蒸馏水调零。

2、在 1.5mL 离心管中依次加入下列试剂：

混匀，置 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴中，保温 15min，于 505nm 波长处读取吸光度。

葡萄糖含量计算：

1、按蛋白浓度计算

葡萄糖含量（µmol/mg prot）＝C ×(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管－A 空白管)×V 样÷（Cpr×V样）

＝0.5×(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管－A 空白管)÷Cpr

2、按样本鲜重计算

葡萄糖含量（µmol/g 鲜重）＝C ×(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管－A 空白管) ×V 样÷（W÷V样总×V 样）

＝0.5 ×(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管－A 空白管) ÷W

3、按细菌或细胞数量计算

葡萄糖含量（µmol/10⁴ cell）＝C ×(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管－A 空白管) ×V 样÷（500÷V样总×V 样）

＝0.001 ×(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管－A 空白管)

C：葡萄糖溶液浓度，0.5µmol/mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V 样：加入的样本体积，100µL=0.1mL；V 样总：样本总体积，1mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞数量，500 万。

注意：若 A 测定管大于 1.5，稀释后进行实验。