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产品名称:谷氨酸脱羧酶(GAD)测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:YX-W-GAD,YX-C-GAD

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-GAD

谷氨酸脱羧酶(GAD)测试盒

可见分光光度法

50管/24

450

YX-W-GAD

谷氨酸脱羧酶(GAD)测试盒

微量法

100管/48

850

谷氨酸脱羧酶((Glutamate decarboxylase,GAD)试剂盒说明书(可见分光光度法

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

谷氨酸脱羧酶是将谷氨酸转化成抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)的限速酶,γ-氨基丁酸是中枢神经系统中有效的抑制性神经递质,具有降血压、增进脑活力、营养神经细胞、保持神经安定、促进生长激素分泌和保肝利肾等作用,目前在医药和保健食品中已有广泛的应用。

测定原理:

GAD 催化谷氨酸产生 GABA,利用 berthelot 反应测定 GABA 含量,从而测定 GAD 活性。

需自备的仪器和用品:

分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 30mL×1 瓶,4℃保存; 试剂一:液体 6mL×1  瓶,4℃保存;

试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存; 试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;

试剂四:液体 10mL×1  瓶,4℃保存;

试剂五:液体 20mL×1 瓶,4℃避光保存; 试剂六:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;

试剂七:液体 35mL×1  瓶,4℃保存。

样品测定的准备:

1、细菌或细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3S,间隔 10S,重复30 次);8000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、组织的处理:按照组织质量(g):提取液体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),冰浴中匀浆。8000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

1、在EP 管中加入如下试剂

试剂名称(μL

对照管

测定管

样本

 

100

95℃水浴灭活样本

100

 

试剂一

100

100

试剂二

100

100

混匀,40℃水浴反应 1h,95℃水浴 10 分钟终止反应,冷却至室温,取反应液待用

2、在新 EP 管中加入如下试剂

反应液

120

120

试剂三

30

30

试剂四

150

150

试剂五

300

300

混匀,室温静置 5min

试剂六

300

300

混匀,室温静置 5min

试剂七

600

600

混匀,取 1mL 于 1mL 玻璃比色皿,测定 640nm 下吸光值 测定与对照,ΔA=A 测定-A 对照,每个测定管设一个对照管。

GAD 活力计算:

1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.1364x - 0.0432,R2  = 0.999;x 为标准品浓度(μmol/mL),y 为吸光值。

2、按照蛋白浓度计算

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μmol GABA 定义为一个酶活力单位。

GAD 活力(μmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0432) ÷0.1364×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T

=0.366×(ΔA+0.0432) ÷Cpr

3、按样本鲜重计算

单位的定义:每g 组织每分钟催化产生 1μmol GABA 定义为一个酶活力单位。

GAD 活力(μmol/min/g 鲜重)=(ΔA+0.0432) ÷0.1364×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总)÷T

=0.366×(ΔA+0.0432) ÷W

4、按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1μmol GABA 定义为一个酶活力单位。

GAD 活力(μmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0432) ÷0.1364×V 反总÷(500 ×V 样÷V 样总)÷T

=0.0007×(ΔA+0.0432)

V 样:加入样本体积:0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;V 反总:反应体系总体积, 0.3mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万; T:反应时间,60min。


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