产品名称:纤维素(CLL)含量测试盒
产品规格:50管/48样,100管/96样
产品货号:YX-C-B634,YX-W-B634
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-B634 |
纤维素(CLL)试剂盒 |
可见分光光度法 |
50管/48样 |
500 |
YX-W-B634 |
纤维素(CLL)试剂盒 |
微量法 |
100管/96样 |
950 |
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、80%乙醇、丙酮、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。
试剂(μL)
标准管
测定管
样本
300
标准品
300
工作液
70
70
浓硫酸
630
630
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 50mL× 1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 10mL× 1 支,4℃保存。
标准品:粉剂10mg× 1支,4℃保存;含 10mg 无水葡萄糖(干燥失重<0.2%),临用前加入 1mL 蒸馏水溶解,配制成 10mg/mL 葡萄糖溶液备用,4℃可保存 1 周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。
样品的前处理:
1、细胞壁的提取:取约 0.3g 样本(计为M1),加入 1mL 80%乙醇,室温快速匀浆,95℃水浴 20min,冷却至室温,4000g 25℃离心 10min,弃上清。沉淀加入 1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(涡旋振荡 2min 左右,4000g 25℃离心 10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入 1mL 试剂一(去除淀粉)浸泡 15 小时,4000g 25℃离心 10min,弃上清,1mL 80%乙醇洗涤两次,弃上清,将沉淀干燥,称重得细胞壁物质(CWM质量计为M2)。
2、纤维素的提取:称取烘干的 CWM 约 5mg(计为W),加入 0.5mL 蒸馏水充分匀浆,匀浆液转移至 EP 管中,用蒸馏水定容至 0.5mL,置于冰水浴中,缓慢加入 0.75mL 浓硫酸,混匀,冰水浴中静置 30min。8000g 4℃离心 10min,取上清液,用蒸馏水稀释 20 倍后待测。
标准溶液准备:
将 10mg/mL 葡萄糖标准液进行二倍稀释得到 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156mg/mL 标准溶液备用。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 620nm,蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至 95 度。
3、工作液的配制:在试剂二中加入 4mL 试剂三,充分溶解,如较难溶解,可加热搅拌;用
不完的试剂 4℃保存一周;
4、加样表(在 EP 管中反应):
混匀,置 95度水浴中 10min(盖紧,以防止水分散失),冷却至室温后,于 620nm 处读数
纤维素含量计算:3. 如样本OD值大于1.5,可在纤维素提取过程中扩大稀释倍数,计数过程中乘以对应的稀释倍数。
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