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产品名称:谷丙转氨酶/丙氨酸氨基转氨酶(GPT/ALT)测试盒

产品规格:50管/24样,100管/48样

产品货号:YX-C-A900,YX-W-A900

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

YX-C-A900

谷丙转氨酶/丙氨酸氨基转氨酶(GPT/ALT)测试盒

可见分光光度法

50管/24样

120

YX-W-A900

谷丙转氨酶/丙氨酸氨基转氨酶(GPT/ALT)测试盒

微量法

100管/48样

180

谷丙转氨酶(GPT)活性检测试剂盒说明书(微量法
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
产品内容:

提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 3.5 mL×1 瓶,4℃保存; 

试剂二:液体 3.5 mL×1 瓶,4℃保存; 

试剂三:液体 30 mL×1 瓶,4℃保存;

标准品:液体 1mL×1 支,20µmol/mL 丙酮酸钠标准品,4℃保存。
产品说明:
GPT(EC 2.6.1.2)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化氨基酸和酮酸转氨基反应,在氨基酸代谢中具有重要作用。此外,哺乳动物肝细胞 GPT 活性很高,当肝细胞坏死,GPT 释放到血液中,血清 GPT 活性显著增高。因此,GPT 被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
GPT 催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应,生成丙酮酸和谷氨酸;加入 2,4-二硝基苯肼溶液,不仅终止上述反应,而且与酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在碱性条件下呈红棕色,可以在 505nm 读取吸光值并计算酶活力。
试验中所需的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样品测定的准备
1、 细胞或细菌的制备 :
先收集细胞或细菌样品到离心管内,弃上清,按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液,超声波破碎细胞或细菌(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)。3500g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进冰浴行匀浆。3500g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样品:直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 505nm,蒸馏水调零。
2、 标准曲线的测定
首先将标准品稀释至 2µmol/mL,按下表混合标准品和试剂一得到浓度梯度标准管:

标准品(µL

试剂一(µL

标准管浓度(µmol/mL

22.5

7.5

1.5

15

15

1

12

18

0.8

6

24

0.4

3

27

0.2

1.5

28.5

0.1

0.75

29.25

0.05

0

30

0

3、 在 EP 管或在 96 孔板中加入下列试剂


试剂名称(µL

测定管

对照管

标准管

待测样本

5

 

 

试剂一

25

25

 

标准液

 

 

30

混匀后,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 30min

试剂二

25

25

25

待测样本

 

5

 

混匀后,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)准确反应 20min

试剂三

240

240

240

混匀,室温放置 10min,在 505nm 波长处测各管吸光度。

:0µmol/mL 标准管为空白管。
三、计算
1、标准曲线的绘制:
以各标准溶液浓度为 x 轴,以∆A(A 标准管-A 空白管)为 y 轴做标准曲线,得到方程 y=kx+b。将(A 测定管-A 对照管)带入方程求 x 值。
2、GPT 活性计算:
(1) 按样本鲜重计算:
单位定义:每小时每 g 样品催化产生 1µmol 丙酮酸的量为一个 GPT 活力单位。
GPT(U/g 鲜重)=x×(V 样本+V 试剂一)÷(W×V 样本÷V 样总)÷T=12x÷W。
(2) 按样本蛋白浓度计算:
单位定义:每小时每 mg 组织蛋白催化产生 1µmol 丙酮酸的量为一个 GPT 活力单位。
GPT(U/mg prot)=x×(V 样本+V 试剂一)÷(Cpr×V 样本)÷T=12x÷Cpr。
(3) 按血清(浆)体积计算:
单位定义:每小时每 mL 血清(浆)样品催化产生 1µmol 丙酮酸的量为一个 GPT 活力单位。
GPT(U/mL)=x×(V 样本+V 试剂一)÷V 样本÷T=12x。
(4) 按细胞或细菌数量计算:
单位定义:每小时每 104 个细胞或细菌催化产生 1µmol 丙酮酸的量为一个 GPT 活力单位。
GPT(U/104 cell)=x×(V 样本+V 试剂一)÷(500×V 样本÷V 样总)÷T=0.024x。

V 样本:样本体积,0.005mL;V 试剂一:试剂一体积,0.025mL;V 样总:提取液体积,1mL;W:样本鲜重,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;T:反应时间,0.5h;500:细胞或细菌总数,万。



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