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产品名称:维生素B6(Vitamin B6,VB6)测试盒

产品规格:50管/48样,100管/96样

产品货号:LE-1-282,LE-2-282

产品报价:

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货号

产品名称

检测方法

规格

售价(元)

LE-1-282

维生素B6(Vitamin B6,VB6)测试盒

可见分光光度法

50/48

500

LE-2-282

维生素B6(Vitamin B6,VB6)测试盒

微量法

100/96

980

维生素 B6 检测试剂盒说明书(可见分光光度法

产品内容

提取液:液体 36mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 40mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂四:粉剂×1 瓶,4℃避光保存,临用前加入 40mL 蒸馏水混匀,如果一次性用不完,可分 装于-20℃保存待用。

标准品:粉剂×1 支,10mg 维生素 B6 4℃保存。临用前加入 1mL 试剂一, 配成 10mg/mL(即 10000μg/mL)的标准液。

产品说明:

维生素 B6(Vitamin B6)又称吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在体内以磷酸酯的形 式存在, 是一种水溶性维生素,肉类、全谷类、蔬菜和坚果类中含量较高。在机体中参与多种蛋白 质和氨基酸的代谢,对生物体具有极其重要的作用。

VB6 与 4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物,在 400nm 有特征吸收峰。

实验所需的仪器和试剂:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管、蒸馏水。

操作步骤:

一、粗酶液提取:

1、组织: 将样品磨碎,按照质量(g): 提取液体积(mL)为 1:5~ 10 的比例(建议称取约 0. 1g ,加 入 0.6mL 提取液) 加入提取液,60℃浸提 30min ,加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃ 16000rpm 离心 10min,取上清测定(动物组织及其他蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟或反复离心 2-3 次至 上清无混浊)。

2、细胞: 按照细胞数量(104 个): 提取液体积(mL)为 500~ 1000:1 的比例(建议 500 万细胞加 入 0.6mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w ,超声 3 秒, 间隔 7 秒, 总时间 3min);加蒸 馏水 0.4mL ,混匀后于 25℃ 16000rpm 离心 10min ,取上清测定。

3、液体: 直接检测。

二、测定步骤:

1 、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 400nm ,蒸馏水调零。

2 、将 10mg/mL( 10000μg/mL)标准液用试剂一稀释为 125 62.5 31.25 15.625 7.8125μg/mL 标准溶液备用。

3 、操作表:  1.5ml 离心管中依次加入下列试剂:

 

样品对照管

样品测定管

标准管

空白管

空白对照管

样品(µL)

200

200

-

-

-

试剂一(µL)

-

-

-

200

200

标准溶液

μg/mL)

-

-

200

-

-

试剂二(µL)

200

200

200

200

200

试剂三(µL)

300

300

300

300

300

试剂四(µL)

-

300

300

300

-

蒸馏水(µL)

300

-

-

 

300

充分混匀,25℃反应 20min,测定 400nm 处吸光值, 记为 A 样品测定管和 A 样品对照管、 A 空白管、 A 空白对照管,△A=(A 样本测定管-A 样本对照管) -(A 空白管- A 空白对照管)。 空白管、空白对照管只要做一管。

二、维生素 B6 含量计算:

1 、 标准曲线的绘制:

以各个标准溶液的浓度为 x 轴, 其对应的△A 标准为 y 轴, 绘制标准曲线, 得到标准方程 y=kx+b,△A 带入方程得到 x(μg/mL)

2 、 维生素 B6 含量的计算:

1) 按蛋白浓度计算

VB6 μg/mg prot)= x×V 提取÷ V 提取×Crp)= x÷Cpr。

2) 按样本质量计算

VB6 μg/g 鲜重) = x×V 提取÷W=x÷W。

3) 按照细胞数量计算

VB6 μg/104 cell)= x×V 提取÷细胞数量(万个) =x÷细胞数量(万个)

4) 按液体体积计算

VB6 μg/mL)= x×V 提取÷V 提取= x

V 提取: 提取液体积,1mL; V 样: 加入的样品体积,0.04mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

注意事项:

1、A 大于 0.8 时,建议将样品用试剂一稀释后再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。

2、蛋白浓度较高的样品,比如动物组织、豆类种子等,若显色完成后有沉淀产生,将样本稀释后再 测定,在计算公式中乘以稀释倍数。

3、显色完成后立即进行测定,尽量保证反应时间一致。


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