产品名称:维生素E(Vitamin E,VE)试剂盒
产品规格:50管/24样,100管/48样
产品货号:YX-C-A519,YX-W-A519
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货号 |
产品名称 |
检测方法 |
规格 |
售价(元) |
YX-C-A519 |
维生素E(Vitamin E,VE)试剂盒 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
420 |
YX-W-A519 |
维生素E(Vitamin E,VE)试剂盒 |
微量法 |
100管/48样 |
800 |
维生素E 含量检测试剂盒说明书(可见分光光度法 )
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
规格:50T/24S
产品简介:
维生素 E(Vitamin E)是一种天然脂溶性抗氧化剂,能阻断机体不饱和脂肪酸的过氧化,维持 不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能,并可清除超氧阴离子自由基,具有延缓衰老、预防溶血 性贫血等作用,在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。
VE还原Fe3+为Fe2+,Fe2+与1,10-菲罗啉产生有色络合物,在510nm有特征吸收峰。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计、天平、台式离心机、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、漩涡震荡仪、无水乙醇、正庚烷、蒸馏水和 EP 管。
产品内容:
试剂一: 无水乙醇 30 mL×1 瓶, 自备; 室温保存;
试剂二: 正庚烷 30 mL×1 瓶, 自备; 室温保存;
试剂三: 液体 30 mL×1 瓶,4℃避光保存;
试剂四: 液体 7 mL×1 瓶,4℃避光保存;
试剂五: 粉剂×1 瓶,4℃保存;
试剂五贮备液的制备:将试剂五的粉剂溶于 2 mL 无水乙醇配置成贮备液,4℃避光保存待用。 试剂五应用液的制备:取试剂五贮备液用无水乙醇 20 倍稀释后使用,建议当天配置当天使用。 试剂六: 液体 20 mL×1 瓶,4℃保存;
标准品: 液体 20 mg×1 支,-20℃避光保存。临用前加入 1 mL 试剂三,配成 20 mg/mL 的标准品溶液。
操作步骤:
一、维生素 E 的提取:
(1)组织样本
试剂名称 |
|
组织 (g) |
0.1 |
蒸馏水 (µL) |
200 |
试剂一 (µL) |
300 |
试剂二 (µL) |
500 |
匀浆后在漩涡混匀仪上震荡 5 min(充分抽提),于25℃, 5000g 离心 5min, 取上层正庚烷抽提液 300 µL 加入到 900 µL 无水乙醇中(上层抽提液: 无水乙 醇=1:3)混匀待测。 |
(2)血清(血浆) 样本
试剂名称 |
|
血清(血浆) (µL) |
200 |
蒸馏水 (µL) |
200 |
试剂一 (µL) |
300 |
试剂二 (µL) |
500 |
匀浆后在漩涡混匀仪上震荡 5 min(充分抽提),于25℃, 5000g 离心 5min, 取上层正庚烷抽提液 300 µL 加入到 900 µL 无水乙醇中(上层抽提液: 无水乙 醇=1:3)混匀待测。 |
二、测定步骤:
1 、 分光光度计预热 30 min 以上,调节波长至 510 nm ,无水乙醇调零。
2 、 将 20 mg/mL 标准液用试剂三稀释为 50 、25 、12.5 、6.25 、3.125 µg/mL 的标准溶液备用。
3 、 操作表: (在 1.5 mL 离心管中依次加入下列试剂)
试剂名称 |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
待测样本 (µL) |
500 |
500 |
- |
- |
标准溶液 (µL) |
- |
- |
500 |
- |
试剂三 (µL) |
- |
- |
- |
500 |
试剂四 (µL) |
100 |
100 |
100 |
100 |
试剂五 (µL) |
- |
100 |
100 |
- |
试剂一 (µL) |
100 |
- |
- |
100 |
充分混匀,立即记时,25℃反应 5 min |
||||
试剂六 (µL) |
300 |
300 |
300 |
300 |
充分混匀, 于 1 mL 玻璃比色皿,测定 510 nm 处吸光值,记为 A 对照管和 A 测定管,A 标准管 和 A 空白管。计算ΔA=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照 管。 |
维生素 E 含量计算
1 、 标准曲线的绘制:
以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的ΔA 标准为 y 轴, 绘制标准曲线, 得到标准方程 y=kx+b, 将ΔA 带入方程得到 x ( μg/mL)。
2 、 维生素 E 含量的计算:
(1) 按样本质量计算
VE 含量( μg /g 鲜重) =x×4×V 样总÷W = 2x÷W
(2) 按血清(血浆) 体积计算
VE 含量( μg /mL)= x×4×V 样总÷V 血清(浆) = 10x
4:待测样本为 300 µL 的正庚烷抽提液加 900 µL 的无水乙醇,相当于将抽提样本稀释 4 倍后检测; V 样总:提取过程加入正庚烷的体积,0.5 mL;W:样本质量,g;V 血清(浆): 提取过程中加入血清(浆)体积,0.2mL 。
注意事项
1 、离心后,在吸取上层正庚烷抽提液时,切勿将中间无水乙醇与水的液相层吸入,以免影响试验 结果。
2 、若ΔA>0.8 ,建议将样品用试剂三进行适当的稀释,并在计算公式中乘以稀释倍数。
3 、若反应体系产生沉淀,建议将待测样本用试剂三进行适当的稀释,并在计算公式中乘以稀释倍 数
4 、检测过程中,比色皿需用无水乙醇冲洗,勿用蒸馏水以防出现分层影响试验数据。
5 、显色结束后尽快完成测定。
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