维生素 E（VE）试剂盒说明书（分光光度法）

货号：LE-1-280

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

维生素 E（Vitamin E）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是生物体中最主要的抗 氧化剂之一，能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤，维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整 性和正常功能，具有延缓衰老、预防溶血性贫血作用，在医药、化妆品、保健品、食品行业 具有较高的应用价值。

测定原理

VE 还原 Fe3+为 Fe2+ ，Fe2+与 1,10-菲罗啉产生有色络合物，在 530nm 有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、离心机、可见分光光度计、 1 mL 玻璃比色皿、漩涡震荡仪。

试剂组成和配制

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 5mL×1 瓶 ，4℃避光保存。

试剂二： 液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

样本处理

1、组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.2g，加入 1mL 提取液）加入提取液，充分匀浆后用提取液定至 2mL ，在漩涡混匀仪上震荡 5min，于 25℃ ,  5000g 离心 10min，取上层测定。

2、细胞： 按照细胞数量（10⁴ 个）： 提取液体积（mL）为 500~1000： 1  的比例（建议 1000 万细胞加入 2mL 提取液）， 冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒， 总时间 3min）； 在漩涡混匀仪上震荡 5min，于 25℃,  5000g 离心 10min，取上层测定。

3、血清：取 0.2mL，加 1.9mL 提取液，漩涡仪混匀上震荡 5min，于 25℃, 5000g 离心 10min， 取上层测定。

 测定操作

计算公式

标准曲线：y = 0.022x + 0.0065 ， R²  = 0.9978

1、按照蛋白含量计算

VE 含量(μg/mg prot）= (△A -0.0065）÷ 0.022×V 反总÷（V 样×Cpr）

= 181.8× (△A -0.0065）÷ Cpr

2、按照样本质量计算

VE 含量（μg/g）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）

= 181.8×（△A -0.0065）÷ W

3、按照细胞数量计算

VE 含量(μg/10⁴ cell）= (△A -0.0065）÷ 0.022×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）

= 181.8×(△A -0.0065）÷ 细胞数量

4、按照液体体积计算

VE 含量(μg/mL）=  (△A -0.0065）÷ 0.022×V 反总÷V 样×20

= 1818× (△A -0.0065）

V 反总：反应总体积，1mL；：V 样：加入样本体积，0.5mL；V 样总：加入提取液体积，2mL； Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g

注意事项

1、若反应体系产生沉淀，需要将样品进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2、最低检出限为 29.5 μg/g。