产品内容：

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。 

试剂三：液体×1瓶，4℃保存。临用前加入2.5 mL试剂二，混匀。 

标准品：粉剂×1瓶（棕色），4℃保存。临用前配制，加入5.679 mL蒸馏水充分溶解；吸取0.1 mL上述溶液，加入0.9 mL蒸馏水，混匀，即100 μmol/L AsA。 

产品说明： 

AsA又称维生素C。AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。 

抗坏血酸氧化酶（AAO）催化AsA氧化生成DHA，通过测定AsA的氧化速率，即可计算出AsA含量。 

自备仪器和用品：

研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液器和蒸馏水。 

操作步骤：

一、样品中AsA提取：

按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，10000rpm 4℃离心20min，取上清液待测。 

二、AsA测定操作： 

1. 分光光度计预热30 min，调节波长到265 nm，蒸馏水调零。 

2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min以上。 

3. 标准管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL标准液、160μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀，在265nm测定，记录30s和150s的吸光值A1和A2，△A标准管= A1-A2。只需做1~2个。 

4. 测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、160μL试剂二和20μL试剂三，迅速混匀，在265nm测定，记录30s和150s的吸光值A3和A4，△A测定管= A3-A4。 

三、AsA含量计算:

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 

（1） 按蛋白浓度计算 

AsA (μmol/mg prot) =[C标准液×（△A测定管÷△A标准管）×V样总]÷Cpr

=0.1 ×△A测定管÷△A标准管÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算 

AsA (μmol/g ) =[C标准液×（△A测定管÷△A标准管）×V样总]÷W

=0.1 ×△A测定管÷△A标准管÷W

C标准液：100μmol/L；V样总：上清液总体积，1.0 mL=1 ×10^-3 L； Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量（g）。 

b. 使用96孔板测定的计算公式如下 

（1） 按蛋白浓度计算

AsA (μmol/g prot) =[C标准液×（△A测定管÷△A标准管）×V样总]÷Cpr

=0.1 ×△A测定管÷△A标准管÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算 

AsA (μmol/g ) =[C标准液×（△A测定管÷△A标准管）×V样总]÷W

=0.1 ×△A测定管÷△A标准管÷W

C标准液：100μmol/L；V样总：上清液总体积，1.0 mL=1 ×10-3 L； Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量（g）