抗坏血酸含量测定试剂盒说明书（分光光度法）

货号：LE-1-273

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

提取液： 液体100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一： 液体15mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二： 液体8mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三： 液体15mL×1 瓶，4℃保存；

标准品： 粉剂10mg×1 瓶（避光） ，4℃保存（称取1mg加入10mL提取液，即为100 μg/mL标准品）

试验中所需的仪器和试剂：

研钵、冰、低温离心机、可见分光光度计、1 μL玻璃比色皿、可调式移液器和蒸馏水。

产品说明：

AsA 又称维生素c 。AsA 是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底 物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA 在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也  是衡量农作物产品品质的重要指标之一。

抗坏血酸具有较强还原能力将Fe3+还原成Fe2+，邻二氮菲与Fe2+会形成红色螯合物，在534nm处具 有强的吸收法，且吸光值与反应液中抗坏血酸含量呈正比。

操作步骤：

一、样品的前处理：

1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~ 10 的比例（建议称取约 0. 1g 组织，加 入1mL提取液）进行冰浴匀浆。8000g ，4℃离心 20min ，取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量（ 10⁴个） ：提取液体积（ μL）为500~ 1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL提取液） ，冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声3秒，间隔7秒，总时间  3min）；8000g ，4℃离心 20min ，取上清液置冰上混匀待测。

3、血清等液体：按照样本体积（g）：提取液体积(mL)为 1：5~ 10 的比例（建议称取约 0. 1mL 样本，加入1mL提取液） 进行混匀。8000g ，4℃离心 20min ，取上清置冰上待测。

二、测定操作表：

1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至 534nm ，提取液调零。

2、测定前将所有试剂 37℃（哺乳动物） 或25℃ （其它物种） 水浴5min 以上。

3、标准曲线的绘制及样本测定（按顺序加入下列试剂）

充分混匀，室温静置 15min 后，534nm 处测定各管吸光值。如底部有沉淀，离心后再读数

三、抗坏血酸含量计算

根据标准曲线，将样品△A 带入公式中（x ），计算出样品浓度 y（μg/mL）。 

1、按蛋白浓度计算

抗坏血酸（μg / mg prot）=y×V  样÷ （V  样×Cpr）

2、按样本鲜重计算

抗坏血酸（μg /g 鲜重） = y×V  样÷(V  样÷V  样总×W)

3、按细胞数量计算

抗坏血酸（μg /10⁶ceLL）= y×V  样÷(V  样÷V  样总×细胞数量)

4、按体积计算

抗坏血酸（μg /mL）=10y

V 样总：上清液总体积，mL；V 样：加入反应体系中上清液体积；W：样品质量，g ；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；细胞数量：以 106 为单位计量；T：样本稀释倍数。

注意事项：

1、样品处理需匀浆完全，抗坏血酸易分解，需避光保存

2、标准品：现配现用。

3、若不确定样品中抗坏血酸 含量的高低，可稀释几个梯度后再进行测量。

4、因为提取液中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。